《幼兒園工作規程》第六章“幼兒園的工作人員”中第三十五條規定：幼兒園工作人員應擁護黨的基本路線，熱愛幼兒教育事業，愛護幼兒，努力學習專業知識和技能，提高文化和專業水平，品德良好、為人師表，忠於職責，身體健康。在第三十八條規定：幼兒園保育員除符合本規程第三十五條規定外，還應具備初中以上學曆，並受過幼兒保育職業培訓。同時，規定了幼兒園保育員的主要職責，包括：（一）負責本班房舍、設備、環境的清潔衛生工作；（二）在教師指導下，管理幼兒生活，並配合本班教師組織教育活動；（三）在醫務人員和本班教師指導下，嚴格執行幼兒園安全、衛生保健製度；（四）妥善保管幼兒衣物和本班的設備、用具。
依據《幼兒園工作規程》的以上規定，結合幼兒園保育工作的內容，確定幼兒園保育員的工作職責如下：
（一）負責本班室內外衛生清潔工作，為孩子創設清潔、整齊的生活和學習環境。
（二）按照幼兒園衛生消毒製度，做好日常消毒工作，並清洗消毒幼兒在園時弄髒的衣服、被褥等。
（三）妥善管理、保護好本班的一切設施、用品、玩具等。
（四）按時通風，調節室溫，保證室內空氣清新，做好冬季保暖、夏季降溫以及消滅蚊蠅的工作。
（五）負責班級幼兒的飲食，做好正餐及加餐的餐前餐後工作，照顧幼兒飲食。
（六）照顧幼兒睡眠，根據氣溫變化給幼兒增減衣服和被褥。
（七）協助教師開展教育教學活動，培養幼兒良好的衛生、生活和行為習慣。
（八）做好日常的安全工作，確保幼兒的健康和生命安全。
（九）有節約意識，關心全園的建設與發展，維護集體的榮譽和利益。
（十）服從分配，積極與本班老師合作完成幼兒園交給的各項工作任務。